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帕金森?。≒arkinson's disease，PD）是最常見的慢性神經(jīng)系統(tǒng)退行性病變之一, 其主要癥狀是運動功能的改變，如運動過緩、靜止震顫、步態(tài)畸形和姿勢不穩(wěn)等病變，最后導(dǎo)致運動能力喪失。流行病學(xué)調(diào)查顯示，隨著年齡增長PD患病率逐漸增高，55歲以上的人群中，帕金森病的患病率超過1%，65歲以上約為2%，是威脅老年社會人類健康的重大疾病。
小鼠模型研究發(fā)現(xiàn)，過度表達(dá)的野生型或突變型α-synuclein均能引起人類帕金森病的部分關(guān)鍵表型和病理特征。然而，相對小鼠而言，大鼠的神經(jīng)系統(tǒng)與人類更相似， 大腦更發(fā)達(dá)，腦容量、表面積均比小鼠大。大鼠智力更高，對新環(huán)境易適應(yīng)，有探索性，易訓(xùn)練，具備對懲罰和暗示敏感的特性，更加有利于并更廣泛地用于行為學(xué)研究和高級神經(jīng)活動的研究。
中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院醫(yī)學(xué)實驗動物研究所、衛(wèi)計委人類疾病比較醫(yī)學(xué)重點實驗室建立了α -synA53T轉(zhuǎn)基因大鼠模型，該轉(zhuǎn)基因大鼠表現(xiàn)出中腦黑質(zhì)多巴胺神經(jīng)元大量變性丟失的病理改變以及運動協(xié)調(diào)能力下降和步態(tài)障礙的行為學(xué)改變。
1. 轉(zhuǎn)基因表達(dá)α –syn A53T導(dǎo)致大鼠中腦TH陽性神經(jīng)元數(shù)目減少
酪氨酸羥化酶(TH)是多巴胺（DA）能神經(jīng)元合成的限速酶，通過檢測TH陽性細(xì)胞數(shù)目及TH蛋白表達(dá)情況可反映多巴胺神經(jīng)元功能狀態(tài)。

圖1 免疫熒光或者免疫組化檢測轉(zhuǎn)基因大鼠中腦黑質(zhì)TH陽性神經(jīng)元的數(shù)目變化
WT，同窩陰性對照鼠；Tg為α –synA53T轉(zhuǎn)基因大鼠; 1M, 1月齡; 7M, 7月齡。
 

2. 轉(zhuǎn)基因表達(dá)α –syn A53T導(dǎo)致大鼠中腦神經(jīng)元胞漿內(nèi)α –synulcien 聚集
取7月齡轉(zhuǎn)基因大鼠及同窩陰性對照鼠中腦黑質(zhì)組織切片進(jìn)行免疫熒光染色發(fā)現(xiàn)，和對照鼠相比，轉(zhuǎn)基因鼠中腦黑質(zhì)神經(jīng)元出現(xiàn)α –synuclein 陽性著色，且和酪氨酸羥化酶(TH)陽性的神經(jīng)元共定位，提示α –synuclein在多巴胺能神經(jīng)元中特異表達(dá)（圖2）。免疫組化顯示，黑質(zhì)致密部雖無典型的路易小體出現(xiàn)，但神經(jīng)元胞漿內(nèi)有大量的α –synuclein聚集，而且α –synuclein陽性黑質(zhì)神經(jīng)元形態(tài)異常，較對照組中腦黑質(zhì)神經(jīng)元體積?。▓D3）。

圖2  IF檢測人α -synuclein蛋白在轉(zhuǎn)基因大鼠腦黑質(zhì)多巴胺神經(jīng)元中的表達(dá)
WT，同窩陰性對照鼠；Tg為α –synA53T轉(zhuǎn)基因大鼠；DAPI,  DAPI即4',6-二脒基-2-苯基吲哚(4',6-diamidino-2-phenylindole)，TH, 酪氨酸羥化酶(TyrosineHydroxylase,TH)；α-syn, α突觸核蛋白（α -synuclein）；Merge，圖像疊加。

圖3  IHC檢測人α -synuclein蛋白在轉(zhuǎn)基因大鼠腦黑質(zhì)多巴胺神經(jīng)元中的表達(dá)
WT，同窩陰性對照鼠；Tg為α –synA53T轉(zhuǎn)基因大鼠
 

3. 轉(zhuǎn)基因表達(dá)α –syn A53T導(dǎo)致大鼠動作協(xié)調(diào)能力下降
選取7月齡轉(zhuǎn)基因大鼠和同窩陰性對照鼠分別進(jìn)行Rotating rod實驗，發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)基因大鼠較陰性對照大鼠在轉(zhuǎn)棒儀上運動時間減短，動作協(xié)調(diào)能力下降（圖4）。
 

圖4 7月齡轉(zhuǎn)基因大鼠Rotating rod實驗
WT，同窩陰性對照鼠；Tg為α –synA53T轉(zhuǎn)基因大鼠。

步態(tài)指標(biāo) gait parameters	Wt (n=5)	A53T (n=8)	指標(biāo)變化 （%）	P值
前肢步寬(mm)	21.00±6.47	31.07±8.20	47%  ↑	P<0.01
后肢步寬(mm)	25.00±2.31	35.17±9.26	34%  ↑	P <0.05
左前擺動時長(s)	0.144±0.006	0.128±0.010	11%  ↓	P <0.05
左后擺動時長(s)	0.123±0.006	0.108±0.011	12%  ↓	P <0.05
右前擺動時長(s)	0.14±0.003	0.12±0.010	14%  ↓	P <0.01
右后擺動時長(s)	0.12±0.010	0.11±0.007	8%   ↓	P >0.05
左后足跡最大面積	263.44±24.93	160.40±18.34	39%  ↓	P <0.05
右前足跡最大面積	197.11±71.70	164.78±60.71	16%  ↓	P <0.01