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- 小鼠肺癌細胞LEWIS標記腫瘤模型
1.肺癌
肺癌是發(fā)病率和死亡率增長最快，對人群健康和生命威脅最大的惡性腫瘤之一。近50年來許多國家都報道肺癌的發(fā)病率和死亡率均明顯增高，男性肺癌發(fā)病率和死亡率均占所有惡性腫瘤的第一位，女性發(fā)病率占第二位，死亡率占第二位。肺癌的病因至今尚不完全明確，大量資料表明，長期大量吸煙與肺癌的發(fā)生有非常密切的關系。已有的研究證明：長期大量吸煙者患肺癌的概率是不吸煙者的10～20倍，開始吸煙的年齡越小，患肺癌的幾率越高。此外，吸煙不僅直接影響本人的身體健康，還對周圍人群的健康產(chǎn)生不良影響，導致被動吸煙者肺癌患病率明顯增加。城市居民肺癌的發(fā)病率比農(nóng)村高，這可能與城市大氣污染和煙塵中含有致癌物質(zhì)有關。因此應該提倡不吸煙，并加強城市環(huán)境衛(wèi)生工作。2.臨床表現(xiàn)及致病機理
肺癌的臨床表現(xiàn)比較復雜，癥狀和體征的有無、輕重以及出現(xiàn)的早晚，取決于腫瘤發(fā)生部位、病理類型、有無轉(zhuǎn)移及有無并發(fā)癥，以及患者的反應程度和耐受性的差異。肺癌早期癥狀常較輕微，甚至可無任何不適。中央型肺癌癥狀出現(xiàn)早且重，周圍型肺癌癥狀出現(xiàn)晚且較輕，甚至無癥狀，常在體檢時被發(fā)現(xiàn)。肺癌的癥狀大致分為：局部癥狀、全身癥狀、肺外癥狀、浸潤和轉(zhuǎn)移癥狀。
目前認為吸煙是肺癌的最重要的高危因素，煙草中有超過3000種化學物質(zhì)，其中多鏈芳香烴類化合物（如：苯并芘）和亞硝胺均有很強的致癌活性。多鏈芳香烴類化合物和亞硝胺可通過多種機制導致支氣管上皮細胞DNA損傷，使得癌基因（如Ras基因）激活和抑癌基因（如p53，F(xiàn)HIT基因等）失活，進而引起細胞的轉(zhuǎn)化，最終癌變。
肺癌是職業(yè)癌中最重要的一種。估約10%的肺癌患者有環(huán)境和職業(yè)接觸史?，F(xiàn)已證明以下9種職業(yè)環(huán)境致癌物增加肺癌的發(fā)生率：鋁制品的副產(chǎn)品、砷、石棉、鉻化合物、焦炭爐、芥子氣、含鎳的雜質(zhì)、氯乙烯。長期接觸鈹、鎘、硅、福爾馬林等物質(zhì)也會增加肺癌的發(fā)病率，空氣污染，特別是工業(yè)廢氣均能引發(fā)肺癌。發(fā)達國家肺癌的發(fā)病率高，主要原因是由于工業(yè)和交通發(fā)達地區(qū)，石油，煤和內(nèi)燃機等燃燒后和瀝青公路塵埃產(chǎn)生的含有苯并芘致癌烴等有害物質(zhì)污染大氣有關。大氣污染與吸煙對肺癌的發(fā)病率可能互相促進，起協(xié)同作用。
肺臟是對放射線較為敏感的器官。電離輻射致肺癌的最初證據(jù)來Schneeberg-joakimov礦山的資料，該礦內(nèi)空氣中氡及其子體濃度高，誘發(fā)的多是支氣管的小細胞癌。肺結核、支氣管擴張癥等患者，支氣管上皮在慢性感染過程中可能化生為鱗狀上皮致使癌變，但較為少見。家族聚集、遺傳易感性以及免疫功能降低，代謝、內(nèi)分泌功能失調(diào)等也可能在肺癌的發(fā)生中起重要作用。許多研究證明，遺傳因素可能在對環(huán)境致癌物易感的人群和/或個體中起重要作用。
3.小鼠肺癌細胞LEWIS標記腫瘤模型
小鼠肺癌Lewis細胞系廣泛應用于轉(zhuǎn)移瘤的研究，并且在腫瘤化療藥物研究中發(fā)揮著一定的作用。Lewis肺癌細胞系來源于C75BL小鼠初級Lewis肺癌移植瘤，該細胞系具有1,3-bis-(2-氯乙烯)-1-亞硝基脲抗性，但卻對甲氨蝶呤敏感。報道稱，該細胞系在小鼠中具有高效致瘤性，但轉(zhuǎn)移率較低。該細胞在培養(yǎng)瓶中呈多層生長狀態(tài)，檢測發(fā)現(xiàn)該細胞系為鼠痘病毒陰性.
1921年C.C.Little用Lathrop小鼠作近親培育時，用No.57雄鼠和No.52雌鼠交配，培育成C57。在C57中將毛色呈黑色的進行固定，培育成C57BL。1937年Little將維持的C57BL第六組亞系定名為C57BL/6，將第十組亞系定名為C57BL/10，繼而分別維持至今。1947年從Little引入到美國Jackson Lab.，形成C57BL/6J;1951年從Jackson Lab.引到NIH，形成C57BL/6N亞系。六十年代到日本實驗動物中央研究所，1986年自日本實驗動物中央研究所引入到中科院上海實驗動物中心。2001年從美國再次引種。
動物外部特征為：黑色；
遺傳基本組成：a/a,C/C:H-2b,Mup-1b,Ig-1b,T1ab(a/B/C/D/H-2b)
遺傳概貌：符合國標GB14923－94標準
攜帶微生物情況：符合國標GB14922－94 SPF級質(zhì)量標準
繁殖性能：產(chǎn)仔率：89～95％ 平均窩產(chǎn)仔數(shù)：6.98～7.48只
胎間隔：28～36天 離乳存活率：87～93％
3.1 小鼠肺癌細胞LEWIS紅色熒光標記腫瘤模型(LEWIS-DsRed)
模型制作采用C57/BL小鼠；構建帶有篩選標記的載體：chicken-β-actin- promoter-DsRed。采用Lipofectamine 2000 Reagent轉(zhuǎn)染Lewis細胞。轉(zhuǎn)染后，用含G418的培養(yǎng)液篩選細胞，獲得穩(wěn)定表達RFP的細胞株，選擇其中高表達的克隆株擴大培養(yǎng)。
穩(wěn)定高表達DsRed的細胞，在熒光顯微鏡下呈強熒光，并且熒光均勻分布于整個細胞內(nèi)。單克隆DsRed細胞在無G418篩選壓力下，傳代數(shù)次后仍能穩(wěn)定高水平表達DsRed（圖1）。細胞形態(tài)和未轉(zhuǎn)染細胞無明顯區(qū)別。收集處于生長對數(shù)期的高表達細胞株，進行裸鼠皮下接種，采用活體熒光影像系統(tǒng)攝像動態(tài)觀察。從第1周至第4周，隨著腫瘤移植時間的增加，表達紅色熒光蛋白的面積逐漸增大（圖2）。
模型保存狀態(tài)：冷凍；保存地點：中國醫(yī)學科學院實驗動物研究所衛(wèi)生部人類疾病比較醫(yī)學重點實驗室。
3.2小鼠肺癌細胞LEWIS綠色熒光標記腫瘤模型(LEWIS-eGFP)
模型制作采用C57/BL小鼠；構建帶有篩選標記的載體：chicken-β-actin- promoter-eGFP；采用Lipofectamine 2000 Reagent轉(zhuǎn)染Lewis細胞。轉(zhuǎn)染后，用含G418的培養(yǎng)液篩選細胞，獲得穩(wěn)定表達GFP的細胞株，選擇其中高表達的克隆株擴大培養(yǎng)（圖3）
3.2小鼠肺癌細胞LEWIS綠色熒光標記腫瘤模型(LEWIS-eGFP)
模型制作采用C57/BL小鼠；構建帶有篩選標記的載體：chicken-β-actin- promoter-eGFP；采用Lipofectamine 2000 Reagent轉(zhuǎn)染Lewis細胞。轉(zhuǎn)染后，用含G418的培養(yǎng)液篩選細胞，獲得穩(wěn)定表達GFP的細胞株，選擇其中高表達的克隆株擴大培養(yǎng)（圖3）
穩(wěn)定高表達GFP的細胞，在熒光顯微鏡下均呈強熒光，并且熒光較均勻的分布于整個細胞內(nèi)。單克隆GFP細胞在無G418篩選壓力下，傳代數(shù)次后仍能穩(wěn)定高水平表達GFP(圖3)。細胞形態(tài)和未轉(zhuǎn)染細胞無明顯區(qū)別。
收集處于生長對數(shù)期的高表達細胞株，C57小鼠皮下接種，采用活體熒光影像系統(tǒng)攝像動態(tài)觀察。應用小動物活體熒光成像系統(tǒng)可監(jiān)測到綠色熒光蛋白在裸小鼠皮下的穩(wěn)定表達，從第1周至第4周，隨著腫瘤移植時間的增加，表達綠色熒光蛋白的面積逐漸增大（圖4）。
收集處于生長對數(shù)期的高表達細胞株，C57小鼠皮下接種，采用活體熒光影像系統(tǒng)攝像動態(tài)觀察。應用小動物活體熒光成像系統(tǒng)可監(jiān)測到綠色熒光蛋白在裸小鼠皮下的穩(wěn)定表達，從第1周至第4周，隨著腫瘤移植時間的增加，表達綠色熒光蛋白的面積逐漸增大（圖4）。
模型保存狀態(tài)：冷凍；保存地點：中國醫(yī)學科學院實驗動物研究所衛(wèi)生部人類疾病比較醫(yī)學重點實驗室。
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