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血生化指標(biāo)是動(dòng)物實(shí)驗(yàn)過(guò)程中判定實(shí)驗(yàn)結(jié)果最常用的指標(biāo)之一，因而血生化檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性直接影響動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果的正確性和可靠性。血清的處理方式是血生化指標(biāo)檢測(cè)過(guò)程中的重要環(huán)節(jié)，如果血清處理不當(dāng)，可直接影響血生化檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。大鼠是醫(yī)學(xué)研究過(guò)程中使用頻率較高的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物種類(lèi)，本文選擇了大鼠的14項(xiàng)常規(guī)血生化指標(biāo)進(jìn)行了檢測(cè)，觀察4℃和-20℃兩種不同保存溫度下血清分別放置0h、4h、24h、96h、7d血生化指標(biāo)的變化，為科研人員在血生化檢測(cè)方面提供技術(shù)指導(dǎo)。

1、 實(shí)驗(yàn)方法

1）血生化測(cè)定 大鼠禁食12h，采集靜脈血液標(biāo)本，靜置1h，分離血清并密封分裝后，分別存放于4℃和-20℃，應(yīng)用全自動(dòng)生化分析儀分別于分離血清后0h、4h、24h、96h、7d檢測(cè)谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）、谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST）、堿性磷酸酶（ALP）、總蛋白（TP）、白蛋白（ALB）、肌酐（CREA?J）、尿酸（UA）、尿素氮（UREA）、血糖（GLU）、總膽固醇（TC）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL?C）、肌酸激酶（CK）和乳酸脫氫酶（LDH）等14項(xiàng)血生化指標(biāo)。

2）統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)分析軟件進(jìn)行處理，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以平均數(shù) ± 標(biāo)準(zhǔn)差（ ±ｓ）表示，數(shù)據(jù)間的比較采用t檢驗(yàn)分析方法，以P＜0.05表示差異有顯著性。

2、結(jié)果

1）雌性SD大鼠血清存放于4℃下放置不同時(shí)間血生化指標(biāo)的變化與oh相比，ALP在4h、24h、96h、7d均顯著降低（P＜0.05），ALB 在96h和7d均顯著升高（P＜0.01），CREA-J在96h顯著升高（P＜0.05），UA在24h、96h、7d均顯著升高（P＜0.01），其他指標(biāo)差異無(wú)顯著性（P＞0.05）。詳見(jiàn)表１。

表1 雌性SD大鼠血清放置不同時(shí)間血生化指標(biāo)的變化（`X ±ｓ，4℃）

注：與0h，∗P＜0.05，∗∗P＜0.01。

2）雄性SD大鼠血清存放于4℃下放置不同時(shí)間血生化指標(biāo)的變化與0h相比，ALP在4h、24h、96h、7d均顯著降低（P＜0.05），ALB 在96h和7d均顯著升高（P＜0.05），CREA-J在96h和7d均顯著升高（P＜0.05），UA在24h、96h、7d均顯著升高（P＜0.01），其他指標(biāo)差異無(wú)顯著性（P＞0.05）。詳見(jiàn)表2。

表2 雄性SD大鼠血清放置不同時(shí)間血生化指標(biāo)的變化（`X ±ｓ，4℃）

注：與0h，∗P＜0.05，∗∗P＜0.01

        3）雌性SD大鼠血清存放于-20℃下放置不同時(shí)間血生化指標(biāo)的變化與0h相比，AST在96h和7d顯著升高（P＜0.05），TP在4h和24h 顯著降低（P＜0.05），ALB 在4h、24h、96h、7d均顯著升高（P＜0.01），CREA-J在24h、96h、7d均顯著升高（P＜0.01），UA在4h、24h、96h、7d均顯著升高（P＜0.01），TC 在4h、24h、96h、7d均顯著升高（P＜0.05），TG 在96h和7d顯著升高（P＜0.05），CK在96h和7d顯著升高（P＜0.05），LDH在96h和7d顯著升高（P＜0.05），其他指標(biāo)差異無(wú)顯著性（P＞0.05）。詳見(jiàn)表3。

表3 雌性SD大鼠血清放置不同時(shí)間血生化指標(biāo)的變化（ `X ±S，-20℃）

注：與0h組比較，∗P＜0.05，∗∗P＜0.01。

  4）雄性SD大鼠血清存放于-20℃下放置不同時(shí)間血生化指標(biāo)的變化與0h相比，ALT 在7d顯著升高（P＜0.01），AST 在96h和7d顯著升高（P＜0.05），TP在4h和24h 顯著降低（P＜0.01），ALB 在4h、24h、96h、7d均顯著升高（P＜0.01），CREA-J在96h和7d均顯著升高（P＜0.01），UA在4h、24h、96h、7d均顯著升高（P＜0.01），TC在4h、24h、96h、7d均顯著升高（P＜0.01），TG在96h和7d顯著升高（P＜0.05），CK在96h和7d顯著升高（P＜0.05），LDH 在96h和7d顯著升高（P＜0.05），其他指標(biāo)差異無(wú)顯著性（P＞0.05）。詳見(jiàn)表4。

表4 雄性SD大鼠血清放置不同時(shí)間血生化指標(biāo)的變化（`X±S，-20℃）

注：與0h組比較，∗P＜0.05，∗∗P＜0.01。

    為避免由于纖維蛋白未完全收縮造成血清中各成分濃度偏高，影響即刻值的準(zhǔn)確性，此次試驗(yàn)是在采集大鼠靜脈血后，先靜置1h，待血標(biāo)本收縮充分后，再離心、檢測(cè)，測(cè)定的數(shù)值做為0h檢測(cè)數(shù)據(jù)。由于血生化檢測(cè)值受待檢動(dòng)物來(lái)源、年齡、性別、血標(biāo)本采集途徑、分離血清前標(biāo)本靜置時(shí)間、檢測(cè)儀器以及檢測(cè)試劑等多重因素的影響，因此收集了與本研究動(dòng)物來(lái)源、鼠齡、性別相同的SD大鼠內(nèi)部檢測(cè)數(shù)據(jù)作為正常值參考范圍。檢測(cè)結(jié)果顯示，0h樣本檢測(cè)值均在正常值參考范圍內(nèi)。

    本實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果表明，血生化檢測(cè)數(shù)據(jù)會(huì)因血清放置溫度和放置時(shí)間的不同而發(fā)生改變。變化的原因是血清放置過(guò)程中標(biāo)本中水分的蒸發(fā)作用、細(xì)胞酸堿度變化以及紅細(xì)胞內(nèi)容物逸出等多方面的作用。

    由實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析，分離血清后，4℃保存時(shí)，放置4h后ALP指標(biāo)較0h顯著降低；-20℃保存時(shí)，放置7dALP指標(biāo)較0h仍無(wú)變化；由此，當(dāng)需要測(cè)定ALP時(shí)，離心后的血清最好即刻檢測(cè)或者-20℃保存一周內(nèi)檢測(cè)。當(dāng)需要測(cè)定UA時(shí)，由于采集的血清無(wú)論4℃還是-20℃保存，放置24h后UA值均顯著或極顯著升高，且放置7d時(shí)UA檢測(cè)值已經(jīng)超出正常參考值范圍，而4℃放置4h則無(wú)顯著變化，所以，離心后的血清最好即刻檢測(cè) UA或者4℃保存4h內(nèi)必須檢測(cè)UA。當(dāng)需要測(cè)定ALB和 CREA-J時(shí)，離心后的血清需4℃保存且需24h內(nèi)檢測(cè)。-20℃保存時(shí)，血清放置7dALT和AST 指標(biāo)較0h均顯著升高，而4℃保存時(shí)，放置7d均無(wú)顯著變化；由此，當(dāng)需要測(cè)定ALT和AST 時(shí)，血清4℃保存一周內(nèi)檢測(cè)即可。-20℃保存時(shí)，TP值出現(xiàn)波動(dòng)，在4h和24h較0h顯著降低，96h和7d較0h無(wú)差異，在4℃保存時(shí)，放置7dTP值均無(wú)顯著變化，測(cè)定TP宜4℃保存7d內(nèi)進(jìn)行。當(dāng)測(cè)定TC、TG、LDL-C等血脂指標(biāo)時(shí)，由于-20℃保存4h后較0hTC和TG均顯著或極顯著升高，而4℃保存時(shí)，放置7d均無(wú)顯著變化，故宜4℃保存血清并一周內(nèi)檢測(cè)。當(dāng)測(cè)定心肌酶指標(biāo)CK和 LDH 時(shí)，由于-20℃保存96h后較0h均顯著升高，而4℃保存時(shí)，放置7d均無(wú)顯著變化，故4℃保存血清并一周內(nèi)檢測(cè)即可。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，無(wú)論4℃還是-20℃保存標(biāo)本，放置7d內(nèi)UREA和GLU檢測(cè)值較0h均無(wú)顯著變化，故7d內(nèi)檢測(cè)即可。

    綜上所述，為了使研究人員更加便于參考，ALT、AST、TP、UREA、GLU、TC、TG、LDL-C、CK及LDH等生化指標(biāo)的檢測(cè)，建議4℃保存血清并7d內(nèi)檢測(cè)即可；ALB和 CREA-J指標(biāo)的檢測(cè)，建議4℃保存血清并24h內(nèi)檢測(cè)；由于放置時(shí)間和方式對(duì)UA指標(biāo)影響較大，離心后的血清最好即刻檢測(cè)或者4℃保存4h內(nèi)檢測(cè)；對(duì)于ALP 的檢測(cè)，離心后的血清最好即刻檢測(cè)，如做不到，可-20℃保存一周內(nèi)檢測(cè)。

    總之，血生化測(cè)定指標(biāo)不同，血清可放置的時(shí)間、放置的方式則不同，為保證血生化檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性，實(shí)驗(yàn)人員可根據(jù)所測(cè)指標(biāo)選擇適宜的血清保存方式并及時(shí)送檢，同時(shí)，檢測(cè)人員也應(yīng)該對(duì)血清及時(shí)進(jìn)行檢測(cè)。此外，標(biāo)本的采集時(shí)間、采集部位、標(biāo)本是否溶血等也都是影響血生化檢測(cè)結(jié)果的重要因素，這些影響因素對(duì)大鼠血生化檢測(cè)結(jié)果的影響情況有待進(jìn)一步探討。

原創(chuàng)作者：康愛(ài)君，李雨薇，王學(xué)文，劉君芳，胡建國(guó)，鄭振輝

原創(chuàng)單位：北京大學(xué)醫(yī)學(xué)部實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科學(xué)部

發(fā)表雜志：中國(guó)比較醫(yī)學(xué)雜志2017年12月第27卷第12期