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實(shí)驗(yàn)動物國家標(biāo)準(zhǔn)中大小鼠微生物檢測項(xiàng)目的考量
      1、我國實(shí)驗(yàn)動物國家標(biāo)準(zhǔn)設(shè)立的背景與意義
          命科學(xué)研究中使用的實(shí)驗(yàn)動物是人類疾病研究的替難者遙 為得到可靠的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)袁實(shí)驗(yàn)動物自身的質(zhì)量需要得到有效的控制遙 因此袁實(shí)驗(yàn)動物的質(zhì)量保障研究一直是實(shí)驗(yàn)動物科學(xué)的研究重點(diǎn)。
    國外實(shí)驗(yàn)動物學(xué)科發(fā)展較早袁其實(shí)驗(yàn)動物產(chǎn)業(yè)較早開始市場化發(fā)展袁市場競爭機(jī)制促使企業(yè)提高實(shí)驗(yàn)動物產(chǎn)品質(zhì)量遙 為了提高自身實(shí)驗(yàn)動物的質(zhì)量袁各企業(yè)均制定了各自企業(yè)的實(shí)驗(yàn)動物質(zhì)量控制。標(biāo)準(zhǔn)遙 國外并沒有一個國家針對實(shí)驗(yàn)動物制定國家標(biāo)準(zhǔn)遙 但是一些實(shí)驗(yàn)動物的社會組織袁比如美國的實(shí)驗(yàn)動物學(xué)會堯歐洲的FELASA組織袁他們對實(shí)驗(yàn)動物的質(zhì)量控制提出了建議或指南,對實(shí)驗(yàn)動物繁育和使用機(jī)構(gòu)的實(shí)驗(yàn)動物的使用具有一定的指導(dǎo)意義。
          我國的實(shí)驗(yàn)動物學(xué)科和實(shí)驗(yàn)動物產(chǎn)業(yè)起步較晚。在我國實(shí)驗(yàn)動物行業(yè)發(fā)展的早期袁實(shí)驗(yàn)動物自身的質(zhì)量袁特別是微生物質(zhì)量沒有保障袁這一狀況嚴(yán)重的阻礙了我國實(shí)驗(yàn)動物行業(yè)的健康發(fā)展袁也使得實(shí)驗(yàn)動物科學(xué)對整個生命科學(xué)研究的支撐作用打了折扣。 為了提高實(shí)驗(yàn)動物本身的質(zhì)量袁我國在1994年以國家標(biāo)準(zhǔn)的形式為實(shí)驗(yàn)動物的生產(chǎn)和使用單位提出了實(shí)驗(yàn)動物質(zhì)量控制的要求。在過去的20多年間,我國的實(shí)驗(yàn)動物國家標(biāo)準(zhǔn)的制定與實(shí)施袁無疑為我國實(shí)驗(yàn)動物質(zhì)量提高起到積極促進(jìn)作用袁同時也使得我國的實(shí)驗(yàn)動物的質(zhì)量保障研究得到長足發(fā)展。
        實(shí)驗(yàn)動物的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)在國家標(biāo)準(zhǔn)層面上不應(yīng) 該是一成不變的。隨著實(shí)驗(yàn)動物科學(xué)的發(fā)展,我國 的實(shí)驗(yàn)動物國家標(biāo)準(zhǔn)也經(jīng)歷了多次修訂。我國實(shí) 驗(yàn)動物國家標(biāo)準(zhǔn)的變化也反映了我國實(shí)驗(yàn)動物科 學(xué)與產(chǎn)業(yè)的進(jìn)步。應(yīng)該明確的是,我國的實(shí)驗(yàn)動物 國家標(biāo)準(zhǔn)從其起草制定開始,其目的就是為了提高 我國實(shí)驗(yàn)動物的質(zhì)量,更好的為我國的生命科學(xué)研 究服務(wù)。國家標(biāo)準(zhǔn)一方面可以對實(shí)驗(yàn)動物生產(chǎn)機(jī) 構(gòu)的產(chǎn)品提出質(zhì)量要求,包括實(shí)驗(yàn)動物的穩(wěn)定性以 及安全性,保障使用者的利益;同時我國的實(shí)驗(yàn)動 物國家標(biāo)準(zhǔn)也是指導(dǎo)實(shí)驗(yàn)動物生產(chǎn)和使用機(jī)構(gòu)科 學(xué)使用和管理實(shí)驗(yàn)動物的規(guī)范性指南。
    2、實(shí)驗(yàn)動物國家標(biāo)準(zhǔn)中動物微生物攜帶狀態(tài)的等 級劃分
          目前,我國的實(shí)驗(yàn)動物國家標(biāo)準(zhǔn)在微生物和寄 生蟲的控制方面將動物進(jìn)行了分級。目前的國家 標(biāo)準(zhǔn)分為普通級、清潔級、無特定病原體級以及無 菌級。對于無菌動物的定義比較好理解,在這種動 物體內(nèi)和體外不應(yīng)存在任何微生物和寄生蟲。但 是對于其他3個級別的定義在現(xiàn)行的國家標(biāo)準(zhǔn)中仍 有待商榷。
          按照現(xiàn)行的國家標(biāo)準(zhǔn),普通級實(shí)驗(yàn)動物區(qū)別于 野生動物的地方在于排除了人獸共患病原體和動 物烈性傳染性病原體。而清潔級增加排除對動物 危害大的病原體和對科學(xué)研究干擾大的病原體。 在這兩個等級中人獸共患病原體必須排除,應(yīng)該說 所有應(yīng)用于科學(xué)研究的動物都需要對人獸共患病 原體加以控制。隨后的兩個概念動物烈性傳染性 病原體和對動物危害大的病原體,這兩個概念如何 理解,涉及的病原體如何區(qū)分?現(xiàn)行的國家標(biāo)準(zhǔn)中 大鼠和小鼠不包括普通級動物,而對于犬和猴又沒 有清潔級動物這個類別,同時使用四個級別的動物 包括了豚鼠、地鼠和兔。對于一些對動物危害大的 病原體,在哪類科學(xué)研究中可以作為實(shí)驗(yàn)材料的實(shí) 驗(yàn)動物攜帶呢?而對科學(xué)研究干擾大的病原體,這 個概念出現(xiàn)在了清潔級動物和SPF級動物的排除范圍,這些概念該如何界定?
          這里需要界定兩個概念。第一,病原體對動物 的危害。動物的烈性傳染病對動物的危害可想而 知,不僅對動物個體本身存在影響,更是對動物群 體產(chǎn)生影響。所有的實(shí)驗(yàn)動物均應(yīng)排除,而其他的 病原體,作為微生物和寄生蟲,都是感染性的,只是 烈性程度可能在一定條件下存在差異。但是對于 實(shí)驗(yàn)動物的影響會存在差異,有些病原體的感染雖 不會引起動物的大量死亡,但會對動物的基本生命 體征產(chǎn)生影響,這些病原體在應(yīng)用于科學(xué)研究的實(shí) 驗(yàn)動物中也需要排除。在一定的歷史階段,由于我 國的實(shí)驗(yàn)動物學(xué)科和產(chǎn)業(yè)發(fā)展的水平的限制,我們 可能無法要求排除這些病原體,但是隨著科學(xué)的進(jìn) 步,所有對科學(xué)研究產(chǎn)生影響的病原體均應(yīng)該得到 有效控制。第二個概念是對科學(xué)實(shí)驗(yàn)動物干擾。 在排除了對大部分科學(xué)研究都有危害的病原體后, 剩余的干擾動物實(shí)驗(yàn)的病原體就有了危害程度上 和危害傾向性上的差異。某些病原體對于動物的 影響是有組織、器官或是系統(tǒng)傾向性的,因此在研 究這些系統(tǒng)的生命現(xiàn)象時,這類病原就需要排除; 而有些病原體,僅僅對某些品系的動物有影響,比 如免疫缺陷的動物,或是基因修飾的動物,某些病 原在其他品系動物呈現(xiàn)潛伏感染不致病的,在這些 動物中就成為了致病因素。因此這些病原在特殊 條件下就需要排除。
          這里就有了另外一個概念,排除特定病原體的 動物(SPF)。實(shí)際上目前國家標(biāo)準(zhǔn)中的普通級動物 和清潔級動物也是排除了特定微生物的動物,也可 以成為SPF動物,只是特定微生物的選擇有一定局 限性。而目前國家標(biāo)準(zhǔn)中的SPF級動物選擇排除 的病原體項(xiàng)目也僅僅是增加了幾個檢測項(xiàng)目。在 排除病原體項(xiàng)目的選擇上目前我們的國家標(biāo)準(zhǔn)是 單一的,但是隨著科學(xué)的發(fā)展,這種單一標(biāo)準(zhǔn)似乎 存在一些問題院列入國家標(biāo)準(zhǔn)的一些病原對某類實(shí) 驗(yàn)干擾不大,排除這些病原無疑增加了生產(chǎn)和使用 成本;更多的是,我們有些研究需要排除一些病原, 但是這些病原體又沒有列入我們的國家標(biāo)準(zhǔn)中。 因此對于SPF的定義在國家標(biāo)準(zhǔn)中不應(yīng)該是特定 的,應(yīng)該給予使用者一定的選擇性。這種選擇的標(biāo) 準(zhǔn)可以有兩個,一個是動物品系的要求,例如對于 免疫缺陷動物,需要排除更多的條件致病微生物; 第二個是使用的需求,對于不同的實(shí)驗(yàn)?zāi)康模羞x 擇的排除病原項(xiàng)目。因此,對于SPF的定義,我們的國家標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)該給出選擇性的指導(dǎo)意見。對于我們的國家標(biāo)準(zhǔn),業(yè)界存在兩種聲音,一 種認(rèn)為我們的國家標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)該僅僅設(shè)定那些嚴(yán)重干 擾動物實(shí)驗(yàn)的病原,或者是降低標(biāo)準(zhǔn);另一種認(rèn)為 我們國家標(biāo)準(zhǔn)的病原覆蓋范圍還不完善,應(yīng)該增加 國外普查的病原,或者可以認(rèn)為是提高標(biāo)準(zhǔn)。實(shí)際 上這兩種意見可以統(tǒng)一起來。對于人獸共患病原 體、對動物危害嚴(yán)重的病原體、對大多數(shù)實(shí)驗(yàn)有嚴(yán) 重干擾的病原體,所有應(yīng)用于科學(xué)研究的實(shí)驗(yàn)動物 中必須排除。排除上述3類病原體的出發(fā)點(diǎn)在于保 障從業(yè)人員的自身健康;保證實(shí)驗(yàn)動物的健康,防 止疫病,維護(hù)實(shí)驗(yàn)動物福利;為了科學(xué)研究的準(zhǔn)確 性,提供實(shí)驗(yàn)動物質(zhì)量。排除這類病原體應(yīng)該是實(shí) 驗(yàn)動物質(zhì)量的最低要求,因此作為國家標(biāo)準(zhǔn),應(yīng)該 是強(qiáng)制執(zhí)行的標(biāo)準(zhǔn)。對于特殊品系的動物,以及有 特殊應(yīng)用的動物,應(yīng)該單獨(dú)制定排除病原范圍,這 類動物不應(yīng)該再執(zhí)行單一的標(biāo)準(zhǔn),SPF動物的定義 應(yīng)該多元化。
    3我國國家標(biāo)準(zhǔn)排除病原項(xiàng)目與國際實(shí)驗(yàn)動物機(jī) 構(gòu)排除項(xiàng)目的區(qū)別
            國外并沒有對實(shí)驗(yàn)動物的質(zhì)量以國家標(biāo)準(zhǔn)的 形式進(jìn)行約束。國外不同的實(shí)驗(yàn)動物生產(chǎn)機(jī)構(gòu)各 自執(zhí)行企業(yè)標(biāo)準(zhǔn),以實(shí)驗(yàn)動物自身的質(zhì)量應(yīng)對市場 競爭。近年來,我國的實(shí)驗(yàn)動物產(chǎn)業(yè)得到較好的發(fā) 展,北京、上海、廣東等地有一些實(shí)驗(yàn)動物生產(chǎn)機(jī)構(gòu) 形成了較大規(guī)模,各企業(yè)自身也制定了企業(yè)標(biāo)準(zhǔn), 也以實(shí)驗(yàn)動物自身的質(zhì)量參與市場競爭。但目前 我國的實(shí)驗(yàn)動物行業(yè)的大環(huán)境仍存在諸多問題,仍 需要行政部門的監(jiān)管。我國的實(shí)驗(yàn)動物國家標(biāo)準(zhǔn) 與國際組織的推薦性的標(biāo)準(zhǔn)以及企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)有什么 不同呢?
           目前國際上重要的實(shí)驗(yàn)動物生產(chǎn)機(jī)構(gòu)Charles River■公司對小鼠可排除20種病毒、15種細(xì)菌,大 鼠可排除14種病毒、16種細(xì)菌。Tacomic公司嚙齒 動物可排除21種細(xì)菌、23種病毒及16種寄生蟲。 而Jackson Laboratory小鼠排除的病原涵蓋18種病 毒、16種細(xì)菌和8種寄生蟲。這些病原檢測項(xiàng)目表 明了生產(chǎn)企業(yè)的技術(shù)能力,是企業(yè)核心競爭力的 體現(xiàn)。
            一些國外企業(yè)檢測的病原體如奇異變形桿菌;病毒如小鼠輪狀病毒(mouse rotavirus),K病 毒(K virus ),小鼠巨細(xì)胞病毒(mouse cytomegalovirus),小鼠胸腺病毒(mouse thymic virus ),小鼠諾如病毒( murine norovirus),小鼠微小病毒 (mouse parvovirus)等,我國現(xiàn)行國家標(biāo)準(zhǔn)中并沒有 涉及,但列入這些企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)中的病原并非必須排 除。某些病原體對于動物的影響目前仍未確認(rèn)。 以小鼠諾如病毒MNV為例,MNV被這些機(jī)構(gòu)列入 了檢測項(xiàng)目,MNV在歐美國家的動物種群中檢出 率比較高,MNV又對某些免疫缺陷動物有影響,出 于多方面原因,MNV被這些企業(yè)列為排查目標(biāo)微生 物,也被FELASA組織作為推薦檢測病原[|]。但是 MNV對于免疫功能完全的動物沒有明顯影響,我們 的實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)正常途徑動物難以感染該病毒(未 發(fā)表數(shù)據(jù))。我檢測實(shí)驗(yàn)室對大群的實(shí)驗(yàn)動物血清 學(xué)抽樣檢測未能發(fā)現(xiàn)MNV抗體的存在,只在一些 研究機(jī)構(gòu)的動物樣品中發(fā)現(xiàn)了 MNV抗體陽性,分 析原因也多出于動物的國際交流[2]。因此,筆者個 人認(rèn)為MNV目前沒有必要列入我國的國家標(biāo)準(zhǔn)進(jìn) 行強(qiáng)制要求。
            我國的實(shí)驗(yàn)動物國家標(biāo)準(zhǔn)一方面規(guī)定了實(shí)驗(yàn) 動物的國家規(guī)范,實(shí)際上還是企業(yè)和諸多檢測單位 參考的標(biāo)準(zhǔn),因此,不僅要考慮病原的危害性,同時 還要參考我國國內(nèi)該病原的流行情況,有些病原雖 然對動物有一定危害,然而感染頻率較低,如果列 入強(qiáng)制標(biāo)準(zhǔn),無疑會增加社會經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。因此各實(shí) 驗(yàn)動物生產(chǎn)和使用單位對于此類病原可考慮自身 情況,安排監(jiān)控,可不再作為國家標(biāo)準(zhǔn)要求的檢測 項(xiàng)目 。
    4目前我國實(shí)驗(yàn)動物國家標(biāo)準(zhǔn)中小鼠、大鼠排除病 原項(xiàng)目的回顧性考量
            是否把某一病原體納入實(shí)驗(yàn)動物健康監(jiān)測范 圍,需要考量的因素有很多,包括院病原的感染范 圍,該病原是否主要感染嚙齒動物,是否也感染人 類;病原的傳播途徑,判定病原的易感性;病原對于 動物的損害,是否存在大范圍流行性感染的可能; 感染的臨床癥狀,是否引起動物疾病;對于動物代 謝、免疫或生理過程的影響水平;動物感染該病原 對于科學(xué)研究的影響。





      表i列出的病原體有些屬于人獸共患的病原 體,例如沙門氏菌、淋巴細(xì)胞脈絡(luò)叢腦膜炎病毒、漢 坦病毒。這些病原體目前在大鼠和小鼠的調(diào)查中 感染率并不高,但是由于它們具有感染從業(yè)人員的 風(fēng)險,因此必須列為實(shí)驗(yàn)動物排查的病原。有些病 原體屬于動物的烈性病原體,如耘糟賊鼠痘病毒,這樣 的病原體也需要在動物種群中做適當(dāng)監(jiān)控。
     大部分病原體對于免疫功能健全的動物并沒 有明顯致病作用,但是對于科學(xué)研究的干擾程度存 在差異。泰澤病原體目前在實(shí)驗(yàn)動物中仍有一■定 檢出率,而且對于實(shí)驗(yàn)研究的干擾較為顯著;肺支 原體情況類似,動物感染有一定檢出率,對多種研 究產(chǎn)生干擾;類似情況也包括小鼠肝炎病毒和仙臺 病毒。而某些病原對于科學(xué)研究的影響是局限性 的,如嗜肺巴氏桿菌主要影響大鼠,感染受累器官 為皮膚,因此涉及皮膚及相關(guān)組織的研究會受到 影響。
     有些病原體屬于條件致病菌,例如金黃色葡萄 球菌、綠膿桿菌等。這些病原體在自然環(huán)境中廣泛 存在,因此實(shí)驗(yàn)動物設(shè)施在控制這些病原時較為困 難,而且動物攜帶這些病原體多無明顯癥狀,且對 于科學(xué)研究的干擾是有限的。因此這類病原體可 以作為環(huán)境監(jiān)控的指標(biāo),對于實(shí)驗(yàn)動物質(zhì)量要求嚴(yán) 格的實(shí)驗(yàn)設(shè)施可以將此類病原體列入監(jiān)控范圍。仍有許多新發(fā)現(xiàn)的病原體,比如嚙齒類動物的 細(xì)小病毒,這類病原體包含很多種,它們是否需要 列入實(shí)驗(yàn)動物質(zhì)量控制的范圍仍需要更多的研究 以及數(shù)據(jù)支持。
     如果某病原屬于人獸共患病原,并且嚙齒類動 物容易攜帶,這樣的病原應(yīng)該例行檢測;如果該病 原對于動物的健康有嚴(yán)重影響,會造成動物的疫 病,那么這樣的病原也應(yīng)該檢測;而有些病原對于 大多數(shù)研究存在證據(jù)充分的干擾風(fēng)險,這樣的病原 也應(yīng)該納入到國家標(biāo)準(zhǔn)中對所有動物進(jìn)行監(jiān)測。 某些病原體可能僅對某一類型的研究存在干擾風(fēng) 險,或是僅對某一種類或是品系的動物有影響,或 者僅是一種條件致病的病原,這樣的病原可以在特 定的條件下選擇性的進(jìn)行檢測。
    國家標(biāo)準(zhǔn)不同于企業(yè)標(biāo)準(zhǔn),列入國家標(biāo)準(zhǔn)中的 病原體也應(yīng)不同于各個設(shè)施自行制定的實(shí)驗(yàn)動物 質(zhì)控計(jì)劃中的病原列表。實(shí)驗(yàn)動物由于不同于普 通的動物,因此也不能僅僅排查動物疫病,只符合 動物檢疫的要求。我國實(shí)驗(yàn)動物國家標(biāo)準(zhǔn)的意義。
     例如沙門氏菌、淋巴細(xì)胞脈絡(luò)叢腦膜炎病毒、漢 坦病毒。這些病原體目前在大鼠和小鼠的調(diào)查中 感染率并不高,但是由于它們具有感染從業(yè)人員的 風(fēng)險,因此必須列為實(shí)驗(yàn)動物排查的病原。有些病 原體屬于動物的烈性病原體,如耘糟賊鼠痘病毒,這樣 的病原體也需要在動物種群中做適當(dāng)監(jiān)控。大部分病原體對于免疫功能健全的動物并沒 有明顯致病作用,但是對于科學(xué)研究的干擾程度存 在差異。泰澤病原體目前在實(shí)驗(yàn)動物中仍有一■定 檢出率,而且對于實(shí)驗(yàn)研究的干擾較為顯著;肺支 原體情況類似,動物感染有一定檢出率,對多種研 究產(chǎn)生干擾;類似情況也包括小鼠肝炎病毒和仙臺 病毒。而某些病原對于科學(xué)研究的影響是局限性 的,如嗜肺巴氏桿菌主要影響大鼠,感染受累器官 為皮膚,因此涉及皮膚及相關(guān)組織的研究會受到 影響。有些病原體屬于條件致病菌,例如金黃色葡萄 球菌、綠膿桿菌等。這些病原體在自然環(huán)境中廣泛 存在,因此實(shí)驗(yàn)動物設(shè)施在控制這些病原時較為困 難,而且動物攜帶這些病原體多無明顯癥狀,且對 于科學(xué)研究的干擾是有限的。因此這類病原體可 以作為環(huán)境監(jiān)控的指標(biāo),對于實(shí)驗(yàn)動物質(zhì)量要求嚴(yán) 格的實(shí)驗(yàn)設(shè)施可以將此類病原體列入監(jiān)控范圍。仍有許多新發(fā)現(xiàn)的病原體,比如嚙齒類動物的 細(xì)小病毒,這類病原體包含很多種,它們是否需要 列入實(shí)驗(yàn)動物質(zhì)量控制的范圍仍需要更多的研究 以及數(shù)據(jù)支持。如果某病原屬于人獸共患病原,并且嚙齒類動 物容易攜帶,這樣的病原應(yīng)該例行檢測;如果該病 原對于動物的健康有嚴(yán)重影響,會造成動物的疫 病,那么這樣的病原也應(yīng)該檢測;而有些病原對于 大多數(shù)研究存在證據(jù)充分的干擾風(fēng)險,這樣的病原 也應(yīng)該納入到國家標(biāo)準(zhǔn)中對所有動物進(jìn)行監(jiān)測。 某些病原體可能僅對某一類型的研究存在干擾風(fēng) 險,或是僅對某一種類或是品系的動物有影響,或 者僅是一種條件致病的病原,這樣的病原可以在特 定的條件下選擇性的進(jìn)行檢測。國家標(biāo)準(zhǔn)不同于企業(yè)標(biāo)準(zhǔn),列入國家標(biāo)準(zhǔn)中的 病原體也應(yīng)不同于各個設(shè)施自行制定的實(shí)驗(yàn)動物 質(zhì)控計(jì)劃中的病原列表。實(shí)驗(yàn)動物由于不同于普 通的動物,因此也不能僅僅排查動物疫病,只符合 動物檢疫的要求。我國實(shí)驗(yàn)動物國家標(biāo)準(zhǔn)的意義
     在于最終提高我國實(shí)驗(yàn)動物這一特殊商品的質(zhì)量, 并以此提升我國的實(shí)驗(yàn)動物產(chǎn)業(yè)發(fā)展,提高我國科 研水平。我國的國家標(biāo)準(zhǔn)還具有引導(dǎo)性,很多機(jī)構(gòu) 將國家標(biāo)準(zhǔn)作為各自單位的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn),而且許 多科研人員對于實(shí)驗(yàn)動物了認(rèn)識不多,對于SPF等 級的動物的認(rèn)識也是不全面的。因此設(shè)定我國實(shí) 驗(yàn)動物國家標(biāo)準(zhǔn)既要考慮強(qiáng)制性要求,同時也要做 好推薦性指導(dǎo)。
     
    參考文獻(xiàn):向志光,佟巍,張麗芳,孔琪,魏強(qiáng)
     
    (中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動物研究所,北京100021)
     
     
     

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